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PCR技术又称聚合酶链式反应,类似于DNA的大然*过程3个基本反应少骡构成。下面就跟随君意生物的小编一起来了解一下吧:

1.模板DNA的变性

模板DNA就是浴安*的DNA片段,模板DNA加热至93℃左右一定时间后,连接碱基的氢键在高温厂断裂,使DNA双链或纤PcR扩增形成的双链DNA解离,pcr*扩增仪厂家,使之成为单镕,并成为下步扩增反应的模板。

2.模扳DNA与引物的退火(复性)

引物是一小段人工合成的20一30个碱基单链DNA或RNA,也是聚合酶链式反(PcR)‘[IA工合成的*起始点,每一条引物都与持扩增的靶区域是特异互补。PCR反应体系中需加入 对。 股在55℃左右,引物就会勺模板DNA单链肋力:补序列配对结。

3.引物的延伸

DNA模板与引物结合物在Tq DNA聚合酶的作均下,*扩增仪报价,以侧为反应原料,靶序列为模板,技碱苯配对原理,合成一条新的州A互补链。新合成的DNA链并不是整个DNA链,而是由引物界定的、生物体特异的loo一枷个碱基对的靶序列。

TN DNA聚合酶是种来源于嗜热水生卤的重组的热稳定的DNA聚合两、聚合酶所不同的是在高温状态仍具有活性。

4.DNA扩增



重复以卜变性、退火、延伸=个过程,就可状得更多的洲A链,这—过程巾新合成的新链又可成为下次循环的模板,使产物的数量按24方式增长。从形论上讲,经过25—30个循环后DNA可扩增ld一10’倍。


(1)引物长度:由于PCR反应的特异性、退火温度以及时间均至少部分与PCR引物长度相关联,因此引物长度是PCR扩增是否成功关键的因素。一般PCR引物长度为15-30核苷酸。

(2)溶解温度(Tm):因加热而断开H键,梯度*扩增仪,使双链DNA分开或“溶解”为单链DNA。溶解温度(Tm)即指使一半双链DNA变为单链DNA的温度。Tm可采用下列公式计算:Tm=2(A T) 4(G C)。

需注意PCR反应至少有两个(一对)引物,两个寡核苷酸引物Tm 值应比较接近,不可差异过大。因有较高的Tm值的引物在较低的反应温度时可发生错配,而引物Tm值较低,反应温度较高时则可能不能发生作用,因此如引物的Tm值差异较大,*扩增仪,可导致PCR扩增效率低下甚至扩增失败。

(3)引物序列互补:设计引物时应绝l对没有3个碱基以上的内引物配对,如引物有这样具有自我配对的区域,“弹回”即部分双链结构将发生在退火反应时。


(4)3’-末端序列:为控制引物错配,应认真地确定PCR引物中3’末端的位置。


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